1??石蠟包埋、切片、脫水；67°C，30min 烤干切片

2??石蠟切片脫蠟至水；

3??抗原修復(fù)
切片稍用于后用【免疫組化筆】在組織周圍畫圈(防止液體流走)，在圈內(nèi)滴加【蛋白酶K工作液】覆蓋組織，室溫孵育20min，37C；將玻片置于PBS洗滌 5min，重復(fù)3次；

4??切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加【破膜工作液 】
(20ul 110%檸檬酸鈉+20ul10%Triton-X100+1980ul ddH2O)覆蓋組織，常溫下孵育 10min，將玻片置于【PBS】洗滌 5min，重復(fù)3

5??加試劑 1、2
按片子數(shù)量和組織大小取 【tunel 試劑盒】內(nèi)適量【試劑 1(TdT)】和【試劑 2(Lable solution)】按 1:9 混合，加到圈內(nèi)覆蓋組織，陰性對(duì)照僅加 50ul【試劑2 Lable solution】，切片平放于濕盒內(nèi)，37°C水鍋孵育60min，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度(試劑2有 FITC 標(biāo)記可以直接在光顯微鏡下觀察)；

6??玻片置于【PBS】避光洗滌 5min，重復(fù)3次。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加【DAPI工作液】50ul染液，室溫避光孵育 5min；

7??玻片置于【PBS 】避光洗滌 5min，重復(fù)3次。切片稍甩干后用抗熒光猝滅封片劑封片；

8??切片于 Olympus 倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像，分析。

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