TRAP染色原理主要基于抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性。TRAP是破骨細(xì)胞的特異性標(biāo)志酶，在含酒石酸的酸性條件下，TRAP能夠?qū)⑤练覣S-BI磷酸鹽水解，產(chǎn)生的萘酚AS-BI與偶氮副品紅或fast red等顯色劑結(jié)合，形成不溶性的紅色沉淀。這種紅色沉淀在酶活性部位沉積，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)TRAP的顯色和定位。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、石蠟切片脫蠟至水：依次將石蠟切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-酒精Ⅲ5min，自來(lái)水漂洗。(冰凍切片直接自來(lái)水漂洗)。

2、染液：A液：醋酸緩沖液 B液：六偶氮副品紅(臨用前亞硝酸鈉與副品紅溶液等比例混合) C液：萘酚AS-BI磷酸酯液。 Trap染液配制：B液1ml+A液18ml+C液1ml混勻過(guò)濾，即為T(mén)rap染液。

3、孵育：將切片用組化筆化圈后放在（加有一定量的防止切片蒸干的純水）濕盒中，用純水37℃孵育2h。

4、染色：切片孵育完成后傾去純水，滴加過(guò)濾好的TRAP工作液覆蓋組織，置于37℃避光反應(yīng)1h。

5、蘇木素染細(xì)胞核：切片入蘇木素染1-3min，自來(lái)水洗，鹽酸水溶液分化數(shù)秒，自來(lái)水沖洗，氨水水溶液返藍(lán)，流水沖洗。

6、脫水封片：切片依次放入無(wú)水乙醇I 5min -無(wú)水乙醇II 5min-無(wú)水乙醇Ⅲ5min -正丁醇5min-二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明，將切片從二甲苯拿出來(lái)稍晾干，中性樹(shù)膠封片。

7、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。

結(jié)果判讀：破骨細(xì)胞胞漿呈酒紅色，核淺藍(lán)色。

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