一、染色原理

1、番紅O的染色原理：

番紅O是一種從藏紅花柱頭中提取的天然染色劑，為橙紅色粉末。它是一種結(jié)合多陰離子的陽離子染料，其顯示軟骨組織是基于陽離子染料與多糖中陰離子基團(tuán)（如硫酸軟骨素或硫酸角質(zhì)素）結(jié)合。

番紅O著色與陰離子的濃度近似成正比關(guān)系，間接反映基質(zhì)中蛋白多糖的含量和分布。當(dāng)軟骨受到損傷時，軟骨中的糖蛋白會釋放出來，使基質(zhì)成分分布不均勻，從而導(dǎo)致番紅O淡染或不著色。

2、固綠的染色原理：

固綠是深綠色粉末或帶金屬光澤的顆粒。它是一種酸性染料，能溶于水和酒精。

固綠主要用于染含有漿質(zhì)的纖維素細(xì)胞組織，如與軟骨下骨膠原纖維結(jié)合，呈現(xiàn)綠色且不易褪色。

二、材料與儀器：

實(shí)驗(yàn)試劑：

無水乙醇、二甲苯、中性樹膠、改良番紅O-固綠軟骨染色試劑盒

實(shí)驗(yàn)儀器：

LEiCA TP-1020脫水機(jī)、LEiCA HistoCore MULTICUT病理切片機(jī)、包埋機(jī)、凍臺、組織攤片機(jī)、烤箱、載玻片、蓋玻片、OLYMPUS CKX43-LP顯微鏡、3DHISTECHP250FLASH全景掃描儀

三、實(shí)驗(yàn)步驟：

1、 石蠟切片脫蠟至水：

依次將石蠟切片放入

?二甲苯Ⅰ20min?二甲苯Ⅱ20min

?無水乙醇Ⅰ3min?無水乙醇Ⅱ3min

?90%乙醇3min?80%乙醇3min

?70%乙醇3min?蒸餾水洗

2、固綠染色：

將切片放入固綠染色液內(nèi)浸染5min，快速用弱酸溶液洗滌切片10-15s，以便去除殘留的固綠，晾干。

3、番紅染色：

將切片放入番紅染色液內(nèi)浸染5min。

4、脫水：

將切片按95%乙醇2-3s、無水乙醇2-3s，無水乙醇1min脫水。

5、透明封固：

切片放入二甲苯中透明，中性樹膠封片。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

嗜堿性的骨與堿性染料番紅O結(jié)合呈現(xiàn)紅色。

嗜酸性的骨和酸性染料固綠結(jié)合呈現(xiàn)綠色。

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