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原理:
馬松(Masson)染液是顯示組織中纖維染色的主要方法之一,是膠原纖維(collagen fiber)染色權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。主要適用于膠原蛋白和平滑肌的鑒別分析。廣泛用于結(jié)締組織、肌肉組織和膠原蛋白的研究等。
該產(chǎn)品染膠原纖維、粘液、軟骨呈藍(lán)色;胞漿、肌肉、纖維素、神經(jīng)膠質(zhì)呈紅色;胞核藍(lán)紫色。
該產(chǎn)品具有無毒、環(huán)保,對人體無傷害、操作簡捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰,顏色鮮艷,對比清晰分明且染色穩(wěn)定、所染切片保存時間長且不易褪色等特點,根據(jù)組織不同的滲透性能,選擇分子大小不同的陰離子的染料進(jìn)行染色,便可把不同組織成分顯色出來。
1. 石蠟切片脫蠟至水;
2. 鉻化處理或去汞鹽沉淀,飽和苦味酸酒精溶液去福爾馬林色素;
3. 依次自來水和蒸餾水洗;
4. 用蘇木素染色液染核5-15min(可以不染細(xì)胞核);
5. 充分水洗,顯藍(lán)后鏡檢,至胞核呈藍(lán)色為止,如如過染可鹽酸酒精分化;
6. 蒸餾水洗;甩干水分,將玻片水平放置在免疫組化濕盒上,沒有此盒的實驗室,建議將玻片水平放置在托盤上或者任何你能找到的容器內(nèi)。在標(biāo)本上,滴加數(shù)滴麗春紅酸性復(fù)紅染色液,染液覆蓋住標(biāo)本即可。水平放置,室溫染色染色5-10min;
7. 使用0.2%冰醋酸水溶液,清洗玻片,去除紅色浮色,每次1min,3次;
8. 甩干玻片上的水分,滴加磷鉬酸水溶液分化處理1-3min;
9. 用濾紙擦掉多余液體,注意濾紙不要接觸到樣本。不經(jīng)水洗,直接用苯胺藍(lán)染色液染5-10min;
10. 用冰醋酸水溶液清洗玻片,去除多余染液,使染色色調(diào)清晰鮮艷即可;
11. 無水酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。
結(jié)果分析:
膠原纖維、黏液、軟骨呈藍(lán)色,胞漿、肌肉、纖維素、神經(jīng)膠質(zhì)呈粉紅色。
注意事項:
1. 無水酒精、二甲苯透明、中性樹膠需自備;
2. 鉻化處理及脫汞:用0.5%碘酒溶液處理10min,水洗,再用0.5%硫代硫酸鈉水溶液脫碘5min,充分水洗;用10%飽和苦味酸酒精溶液再次固定30min,再進(jìn)行步驟3水洗。
3. 此法操作程序較多,一定要控制好染色步驟,熟練掌握后才能得到較滿意的染色結(jié)果;
4. 組織固定起著很重要的作用,根據(jù)不同的固定液可延長或縮短染色時間;
5. 0.2%冰醋酸水溶液洗,可使色調(diào)清晰鮮艷,不夠可以自己配制;
6. 磷鉬酸對麗春紅酸性復(fù)紅有分化作用,分化時鏡下控制,肌纖維和纖維素呈紅色,膠原纖維呈淡粉紅色即可。
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